原代細胞培養(yǎng)也被稱為初代培養(yǎng)，是建立細胞系的第一步。

原代細胞培養(yǎng)的應(yīng)用廣泛：

1. 為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；

2. 為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；

3. 服務(wù)于臨床實踐，用于藥物篩選等。

其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持。

原代細胞培養(yǎng)需要一定的技巧，尤其是一些細節(jié)，不然很容易翻車，今天給大家匯總了一些原代細胞培養(yǎng)的小技巧，希望大家能有所收獲！

取材

取材是原代細胞培養(yǎng)過程中的第一步，也是至關(guān)重要。

下表為一些常見組織的取材注意事項。

 

分離

一、組織塊培養(yǎng)法

1、組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。為保證組織塊附著于瓶壁上，要避免頻繁晃動。

2、加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。

3、當細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長。

4、為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。

二、貼壁型原代細胞

1、原代培養(yǎng)的分離細胞，在初次接觸體外環(huán)境時，細胞之間會互相影響，產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì)，促進彼此的存活和生長。

因此，接種密度要適宜。如果接種的細胞密度過低，細胞之間的促生長作用很小，也很難使細胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進入獨立生存環(huán)境的變化過程；如果接種的細胞密度過大，會導致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。

2、盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。可以在接種后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h，待細胞貼壁后，再補足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

三、懸浮型原代細胞

1、必須保持細胞的懸浮狀態(tài)。可以通過增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液，以5ml為最di限度，否則攪拌時會產(chǎn)生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則既容易使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細胞換液時要注意不要吸出細胞。

2、能夠進行懸浮培養(yǎng)的細胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養(yǎng)成分消耗大，換液時間隔一般較短。

培養(yǎng)

當原代細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，就可按照正常細胞培養(yǎng)流程進行培養(yǎng)即可。

血清在細胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻：

• 提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

• 提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

• 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

• 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

• 起酸堿度緩沖液作用。

• 提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

• 參與細胞凍存。

• ......

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